什么是超微量分光光度计

超微量分光光度计是精密的光谱仪器，常用来检测A230、A260、A280，并以此分析核酸以及蛋白的浓度和纯度，在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域都有非常广阔的应用。相较传统分光光度计，超微量分光光度计的主要特点是上样量低，仅需1滴样品（核酸样品仅需0.5微升，蛋白样品需1微升），即可完成检测。

超微量分光光度计工作原理

与传统分光度计一样，超微量分光光度计遵从郎伯比尔定律：A=log(I₀/I₁)=k*l*c。在检测核酸蛋白时，超微量分光光度计可以测试获得样品浓度，无需使用标准品，无需建立标准曲线。

A：吸光值，表示物质对光的吸收程度，通常，仪器将光谱归一化为1 cm光程当量。

I₀：入射光强度

I₁：透射光强度

k：消光系数，表示为某波长下，光程为1 cm时，物质在一定浓度下的吸光度

l：光程，仪器根据样本浓度自动调整光程

c：样品浓度

核酸检测

超微量分光光度计检测A260，并以此对核酸进行定量。通常，核酸包括dsDNA、ssDNA和RNA，他们的消光系数各不相同。进行检测时，先用溶剂进行空白检测，再滴加0.5~2微升样品在上样台上进行检测。

核酸的消光系数：定义系数f，f=1/(k*l)，其中l=1 cm，f(dsDNA)=50,f(ssDNA)=33,f(RNA)=40。

A260：样品在260 nm处的吸光值，浓度c=f×A260

A260/A280：核酸纯度指标，DNA约为1.8，RNA约为2.0

A260/A230：核酸纯度指标，纯核酸约在1.8~2.2之间

蛋白检测

超微量分光光度计检测A280，并以此对蛋白进行定量。蛋白质成分复杂，因氨基酸序列和蛋白质空间结构不同，他们的消光系数各不相同。进行检测时，先用溶剂进行空白检测，再滴加1~2微升样品在上样台上进行检测。

A280：样品在280 nm处的吸光值，c=10*A280/k。

如何评价超微量分光光度计的性能

依据《微量分光光度计校准规范 JJF 1836-2020》，主要通过三个方面评价仪器性能。

重复性检测：对一个样品进行上样/检测/清洗的操作流程，重复操作3-5次，如果重复性偏差小于5%，说明稳定性良好，结果可靠。

线性检测：将样品稀释成不同浓度，检测这些样品得到的数据做曲线，和由稀释操作得到的理论标准模型曲线是否无限接近。表现为趋势性拟合的曲线R2是否接近1。可以认为在R2超过0.995的情况下，吸光度数据是真实随着浓度变化的，数据是可靠的。

准确性检测：使用标准品验证浓度，超微量分光光度计出厂前会进行校准，但由于仪器硬件老化、光源亮度变化等原因，仪器检测数值可能发生变化，可联系厂商进行校准维护。